棉 花 学 报 Cotton Science 2009，21(5)：351-355
油脂形成期棉花种子全长 cDNA 文库的构建 摘要：提取海岛棉 7124 开花后 25 ～ 35 d 胚的总 RNA ，利用 SMART 技术，经 21 轮 LD-PCR 扩增获得全长双链 cDNA ，经 Sfi Ⅰ酶切、层析柱分离后，收集 500 bp 以上的片段与 pDNR-Lib 载体连接并转化到感受态 DH10B 细胞，构建了棉花种子全长 cDNA 文库。所构建的原始文库库容为 5×106，文库滴度为 1.5×108 cfu·mL-1。在文库中随机挑取 180 个克隆进行 PCR 检测，结果显示，文库中插入片段长度为 0.5～2.5 kb ，将挑取的 180 个单克隆进行 EST 测序，无空载序列，说明文库重组率为 100%；序列分析结果表明，其中与油脂形成相关的 EST 有 13 条。以上数据说明构建的文库质量较高，为进一步从文库中分离棉花脂肪酸代谢关键基因，提高棉花含油量奠定了基础。
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