棉 花 学 报 Cotton Science 2009,21(5):346-350
一个棉花黄萎病抗菌肽基因 25a2 的克隆与表达 摘要:将棉花黄萎病抗菌肽 A2 的 N 端 15 个氨基酸序列在 NCBI 进行同源序列比较,根据同源蛋白的 DNA 序列设计引物,以解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) RS-25 菌株基因组为模板,应用 PCR 扩增出一条约 300 bp 的 DNA 片段。序列分析表明,DNA 片段长 354 bp,编码 117 个氨基酸,将该基因命名为 25a 2。构建表达载体 pET -28a-25a2,转化大肠杆菌(Eschrichia coli)BL21,37℃ 培养,应用终浓度为 1 mmol·L-1的 IPTG 诱导,表达产物经 SDS-PAGE 分析,得到分子量约 15 kDa 表达蛋白条带,与理论蛋白分子量相符。
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