棉花学报  Cotton Science 2005，17(3)：146-150

棉叶总蛋白提取及SDS-PAGE电泳的改良
沙月霞^1，2，简桂良²，肖崇刚¹，卢美光²，曹承忠²
(西南农业大学植物保护学院，重庆 400716；2．中国农业科学院植物保护研究所，植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100094)

摘要：对棉花叶片总蛋白的几种提取方法及影响蛋白定量和SDS-PAGE电泳的因素进行了比较，确立了一套适用于棉花蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、脱色以及干胶制备的方法。发现利用25mmol．L^-1•pH 8.0 Tris—HCl缓冲液提取的棉花叶片总蛋白，提取效率高，蛋白齐全。采用改良后的棉花SDS-PAGE电泳方法一改良丙酮沉降法，电泳结果显示，条带清晰、数量多、分辨率高。
关键词：棉花叶片；总蛋白提取；十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳
中图分类号：S435．621   文献标识码：A
文章编号：1002-7807(2005)03-0146-05     [全文，2139KB]

参考文献：
[1] 奥斯伯，F布伦特，R金斯顿，等. 精装分子生物学实验指南[M]．北京：科学出版社，1998．334-338．
[2] 李建武．生物化学实验原理和方法[M]．北京：北京大学出版社，1994．218．
[3] 耿川东，谢伟军，龚蓁蓁，等. 抗棉黄萎病菌的抗病蛋白质研究[J]．江苏农业学报，1997，13(4)：206-210．
[4] 袁凤华．马铃薯抗菌蛋白分离、纯化、理化特性及免疫金定位[D]．中国农业科学院，1995．
[5] 崔晓慧．黑芝麻中抗菌蛋白的分离纯化及其主要性质[D]．中国农业科学院，2000．
[6] BOWLES D J．Defense-related proteins in higher p1ants[J]．Annu Rev Biochem，1990，59：873-907．
[7] GREGORY B M，Adam J B，Guido S．Understanding the functions of plant disease resistance proteins[J]．Annu Rev Plant Biol，2003，54：23-62．
[8] CHUNG，Roland P T，Neumann G M，et al．Purification and characterization of basic proteins with in vitro antifungal activity from seeds of cotton Gossypium hirsutum[J]．P1ant Science，1997，127：1-16．
[9] WANG Xing，Thoma R S，Carroll J A．Temporal generation of multiple antifungal Proteins in primed seeds[J]．Biochemical and biophysical research communications，2002，292(1)：236-242．
[10] WANG Xing，Bunkers G J，Walters M R．Purification and characterization of three antifungal proteins from cheeseweed (Malva Parviflofa)[J]．Biochemical and Biophysical Research Communications，2001，282(5)：1224-1228．
[11] FENG J，Yuan F H，Gao Y，et a1．A novel antimicrobial protein isolated from potato(Solanum tuberosum)shares homology with an acid phosphatase[J]．Biochemical Society，2003，376：481-48．
[12] 谷瑞升，刘群录，陈雪梅，等．木本植物蛋白提取和SDS-PAGE分析方法的比较和优化[J]．植物学通报，1999，16(2)：17l-177．
[13]BROEKAERT W F，Terras F R G，Cammue B P A．P1ant defensins：Novel antimicrobial peptidesas components of the host defense system[J]．P1ant Physiol，1995，108(4)：1353-1358.