棉 花 学 报    Cotton Science   2007,19(4):248-254

 

细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗基因表达差减文库
的构建及EST分析

张志刚1,2,3,邱德文2*,杨秀芬2,曾洪梅2,袁京京2,刘 峥2,杨晓萍3,官春云1
(1.湖南农业大学,长沙 410128;2.中国农业科学院植物保护研究所,北京 100081;3.湖南省棉花科学研究所,常德 415000)

摘要:利用细极链格孢菌蛋白激发子粗提蛋白液诱导棉花苗期相关基因表达,以清水喷施为对照样本,进行抑制差减杂交,构建棉花苗期基因表达文库。结果显示,插入片段的大小主要集中在200~1000bp。随机选取150个克隆进行菌液 PCR 检测与测序,并将所测序列与GenBank dbEST库进行比对,共得到104个单一序列。其中,78个EST 与其它物种已知基因部分区域的同源性为48.54%~100%,占总 EST 的75%;6条 EST 序列能在数据库中检索到同源性序列,但其功能尚不清楚,占 5.77%;10个EST 能在数据库中发现为推测蛋白,占9.6%;10个EST 在 GenBank 中没有查到对应的同源序列,可能是新基因,占9.6%。同时,将所得到的104条 EST 序列在 WEGO 网站上进行功能分类,通过Gene ontology 确定具体 EST 的分子功能。其中,在生物途径分类中,与生理途径和细胞过程相关的 EST 最多,分别为48个和45个;在细胞组份功能分类中,与细胞相关的 EST 最多,达到44个;在分子功能分类中,催化功能与分子绑定相关的 EST 数量最多,分别达到了30个和28个。由此可见,细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗时涉及到植物的生理生化的多条途径,受到多个基因的调控,可能包括抗病与防御蛋白、信号传导蛋白、转录因子、能量代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白、细胞保护机制蛋白、功能未知及其它蛋白等相关蛋白。
关键词:细极链格孢菌蛋白激发子;棉花;抑制性差减杂交(SSH);EST
中图分类号:S562.035.3    文献标识码:A
文章编号:1002-7807(2007)04-0248-07  [全文,3845KB]